利用red重组系统敲除大肠杆菌o157:h7的waal基因

目的:利用λ噬菌体red重组系统敲除大肠杆菌o157:h7的waal基因。方法:以pkd4为模板扩增出与waal基因上下游同源的、含有卡那霉素抗性基因的pcr产物。然后电击转化到大肠杆菌o157:h7中,利用red重组系统,通过卡那霉素抗性基因两侧的waal基因序列在体内与waal基因发生同源重组,置换了o157:h7基因组中的waal基因。并进一步利用卡那霉素抗性基因两侧的frt位点,通过flp位点专一性重组将卡那霉素抗性基因敲除。结果:成功构建了敲除waal基因且不带卡那霉素抗性基因的菌株。