内毒素结合肽的改良、原核表达及纯化

目的：对人内毒素结合肽(endotoxinbindingpeptide,ebp)进行改良，获得突变体mebp(mutateofendotoxinbindingpeptide,mebp)基因并进行原核表达，纯化获得高纯度的mebp。方法：应用pcr定点诱变方法获得mebp基因，构建pinpointxa-3/mebp融合表达载体,在bl21(de3)plyss宿主菌进行表达，溶菌酶裂解法提取包涵体，融合蛋白经pinpointtmxa纯化后，由factorxa酶切,获得目的肽，rp-hplc纯化获得高纯度的mebp。结果应用pcr定点诱变技术完成了ebp第5.18位谷氨酰胺赖氨酸的定点突变，且通过原核表达，色谱纯化获得了高纯度的mebp。结论成功获得高纯度的mebp,为下一步的抗内毒素功能检测奠定基础。