金龟子绿僵菌(metarhiziumanisopliaehn1)几丁质酶基因的克隆及高效表达

几丁质酶是昆虫病原真菌金龟子绿僵菌致病力的主要因子之一。本实验用rt-pcr方法,从本实验室分离筛选到的高毒力金龟子绿僵菌metarhiziumanisopliaehn1中，扩增得到几丁质酶基因全长，此基因全长为1275bp，登录号为dq011865，经blastn分析此基因序列与m.anisopliaee6的chi1基因（af02749）同源率为96%。以pet-22b(+)为基础载体，构建pet-chi重组表达载体，在大肠杆菌（escherichia.coli）bl21中进行表达。经sds-page分析，获得了42kda大小的重组目的蛋白，目的蛋白占表达总蛋白含量的63.3%。菌体经冷冻与超声波破碎后，按dns法可测得几丁质酶的活性。