重组线虫抗凝肽在毕赤酵母中的表达

目的：获得具有抗凝活性的重组线虫抗凝肽（nap）蛋白,为新型抗凝药物的开发奠定基础。方法：将ppic3.5k-rnap质粒转化毕赤酵母菌株gs115，筛选出阳性菌株后，用甲醇诱导表达。收集酵母培养上清，用sds-page和westernblot分析表达产物，通过测定pt(血浆凝血酶原时间)、inr（血浆凝血酶原国际标准化比率）和aptt（活化部分凝血活酶时间）来验证其生物学活性。结果：获得了稳定表达nap的重组酵母菌株。重组nap被分泌表达，其分子量比预计分子量（8.7kd）稍大，约为10kd左右，可能与糖基化有关。体外活性检测证实其有较强的抗凝活性。结论：在毕赤酵母中成功表达了具有生物学活性的重组线虫抗凝肽，可用于新型抗凝药物的开发。