拟南芥k+转运蛋白atkup1基因的dna改组

采用同源重组法制备钾离子转运蛋白trk1和trk2缺失的酿酒酵母钾营养缺陷型，通过rna反转录pcr方法从拟南芥幼根扩增获得片段长度为2139bp的atkup1基因，以此片段为模板，采用dna改组技术,经dnasei降解,primerlesspcr,primerpcr，建立atkup1基因突变库。将突变库和未经dna重排处理的atkup1基因分别构建酵母穿梭载体导入k+转运蛋白基因trk1和trk2缺失的酿酒酵母中,分别在低钾(5.0mmkcl)不含色氨酸的培养基上筛选转化子,突变基因库酵母转化子中获得2株长势明显好于atkup1基因转化子的突变基因转化菌株，菌株质粒上的突变atkup1基因核苷酸测序结果发现突变基因atkup1发生2个碱基的置换，造成2个氨基酸的改变，转化烟草烟叶化学成分分析证实突变基因的吸钾活性显著提高。