|
中国生物工程杂志 2007
一种新型广谱流感病毒亚单位疫苗的表达与纯化Abstract: 通过引物设计,利用重叠延伸pcr(oe-pcr)和搭桥pcr方法扩增得到a型流感病毒m2蛋白缺失跨膜区基因以及ha多表位基因,分别克隆测序后以pet28a+为表达载体构建重组质粒pet28a+-m2d-ha。将重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3),筛选获得了高效表达流感病毒缺失跨膜区m2蛋白和ha多表位蛋白片段重组融合蛋白的工程菌,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白总量的45%左右。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经亲和层析和阴离子交换层析纯化后复性,得到纯度在90%以上的目的蛋白。westernblot结果显示纯化的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性。此项工作为进一步研究广谱型流感病毒亚单位疫苗奠定了基础。
|