人源溶菌酶基因lyzl4在毕赤酵母中的重组表达及活性测定

lyzl4是本实验室克隆的一种c型人溶菌酶基因，根据毕赤酵母密码子偏爱性对lyzl4基因进行优化设计，优化后的基因克隆至具有乙醇氧化酶启动子（aox1）的ppic9k载体中。通过电转化方法整合到甲醇营养型毕赤酵母表达菌株gs115基因组上，再利用不同浓度梯度的g418抗性ypd固体培养基筛选高拷贝转化子，经摇瓶发酵后，其上清液在sds-page胶上14.4kda处出现明显的蛋白条带，该蛋白条带经质谱鉴定证实是人lyzl4蛋白。以人溶菌酶（164071u/mg）作为标准品，使用艳红微球菌作为底物，通过比色法测定重组lyzl4溶菌酶蛋白的活性，结果显示重组人溶菌酶lyzl4蛋白具有明显的溶菌活性，其酶活力可达38893u/ml。