calb脂肪酶在毕赤酵母中的组成型表达及纯化

根据南极假丝酵母脂肪酶calb的成熟多肽序列，人工合成了由毕赤酵母（pichia？pastoris)偏爱密码子组成的calb基因序列（仅成熟肽）。将该基因克隆至穿梭质粒pgapzαα中，获得的重组质粒pgapzαacalb经线性化后转入毕赤氏酵母gs115菌株,构建成组成型表达calb的酵母工程菌株。酵母转化子在ypd培养基上传代10次后,其外源基因未丢失。经摇瓶发酵4天后，calb水解活力为14.5u/ml。经脱盐和阴离子交换两步纯化后，其纯度达到了95%以上，目的蛋白的含量达到了220mg/l。