日本血吸虫三价dna疫苗pvivo2sjfabp/sj26.sjgapdh的构建及其免疫保护作用评价

目的:构建含有日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白(sjfabp)，3-磷酸甘油醛脱氢酶(sjgapdh)，26kda谷胱甘肽s转移酶(sj26)的三价dna疫苗，并通过药理实验评价其抗血吸虫感染的免疫保护作用。方法:？以血吸虫成虫rna为模板制备cdna第一链，rt-pcr扩增得到抗原基因片段，再通过重组pcr技术，将sj26和sjgapdh融合为sj26.sjgapdh基因。将sjfabp和sj26.sjgapdh分别克隆入pvivo2的mcs1和mcs2，获得重组质粒pvivo2-sjfabp/sj26.sjgapdh。瞬时转染mcf-7细胞，通过逆转录pcr（rt-pcr）检测抗原基因在mrna水平的表达，通过间接荧光免疫（iif）检测抗原基因在小鼠体内抗原水平表达，验证了dna疫苗的有效性；并免疫小鼠后进行免疫保护性初步试验。结果:？经过酶切、测序及体内外表达验证，该三价dna疫苗pvivo2-sjfabp/sj26.sjgapdh构建成功；该三价dna疫苗在小鼠抗血吸虫感染中诱发减虫率和减卵率达到58.6%和59.8%。结论:？该三价dna疫苗组具有比单价和双价dna疫苗组更加良好的免疫保护作用，为日本血吸虫dna疫苗的研制奠定了基础。