猪戊型肝炎病毒基因orf2片段ag02的融合表达及间接elisa方法的初步建立

采用巢式rt-pcr技术扩增猪戊型肝炎病毒（shev）结构蛋白基因orf2部分片段ag02。将该片段插入pet32a表达载体，命名为pet-hev，将重组表达质粒转化大肠杆菌bl21（de-3），经1mmiptg诱导得到表达，进行sds-page分析，证明该片段得到融合表达，分子量为33kd。westernblot分析表明，重组蛋白可以与hev阳性血清反应，表明该蛋白具有良好的抗原性。以纯化的重组蛋白建立了初步的间接elisa方法,经方阵滴定确定最佳包被浓度为2.43μg/ml，血清最佳的稀释比为1:40,与万泰试剂盒相比较，证明我们建立的elisa方法有较高的特异性和敏感性。