人hmgb1分子的克隆、重组蛋白表达与生物学活性

采用rt-pcr,从重症肝炎病人外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcellspbmcs）的mrna中扩增高迁移率族蛋白1（highmobilitygroupbox－1protein，hmgb1）基因，构建重组表达质粒pgex4t-1-hmgb1，转化入大肠杆菌，测序证实其序列与基因数据库中hmgb1基因(nm_002128)一致。诱导表达的融合蛋白gst-hmgb1，用glutathionesepharose4b亲和层析纯化，经thrombin酶切得到hmgb1。结果显示：经western-blotting检测，gst-hmgb1和hmgb1均具有免疫活性；elisa和mtt检测发现，两者均能刺激raw264.7细胞产生大量tnf-α，明显刺激hela细胞增殖。gst-hmgb1具有良好的生物学活性,为今后的研究打下了基础。