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ISSN: 2333-9721
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带his-tag的解脂耶氏酵母脂肪酶lip2在毕赤酵母中的表达及纯化

Keywords: 毕赤酵母,解脂耶氏酵母,组氨酸标签,高密度发酵,脂肪酶

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Abstract:

将去自身信号肽并且n-端带6×his标签的yllip2基因克隆至表达载体ppic9k中,电转化gs115获得高效表达脂肪酶his6-yllip2的基因工程菌。筛选到的阳性克隆子摇瓶发酵脂肪酶活力最高为400u/ml。对重组毕赤酵母在10l发酵罐中表达his6-yllip2的分批补料发酵工艺进行了初步优化,探讨了培养基、ph、温度对生物量和重组蛋白表达量的影响。结果表明:采用fm22培养基,诱导温度为25℃,ph5.0,甲醇诱导114h后his6-yllip2的最高酶活力达到3160u/ml。sds-page分析表明,蛋白的分子量大约为38kda。重组的his6-yllip2经镍柱一步纯化后的纯度达到95.43%,比酶活达到4250u/mg。

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