化学发光southernblot法检测hbv体外复制及其应用于药物对hbv的抑制分析

目的：建立化学发光southernblot检测细胞内hbvdna的方法，同时检测3种不同靶点抗乙肝药物的体外作用。方法：用地高辛标记hbv探针，优化杂交条件，检测来自hepg2及hepg2.2.15hbvdna复制中间体；利用建立的化学发光southernblot检测hbvdna的方法检测经拉米夫定、bay41-4109、α-galcer以不同药物浓度处理的hepg2.2.15hbvdna复制中间体的水平。结果：（1）标记的hbv探针的检测灵敏度为0.1pg，杂交系统的检测灵敏度为1pg，可检测到hepg2.2.15细胞内的hbvdna特异性信号；（2）以该法检测胞内hbvdna可见3种药物都有明显的抑制作用，其半数有效量（ic50）分别为1.53μmol/l、0.41μmol/l、0.01μmol/l。结论：胞质hbvdna的水平能准确地反映不同靶点抗hbv药物的抗病毒效果，建议在观察药物特别是中药抗病毒研究中采用。