用fret方法研究与mps1蛋白有相互作用的cenp-e蛋白结构域

目的：探索与mps1蛋白有相互作用的cenp-e蛋白结构域。方法：将重组质粒pegfp-cenpe2（674~1085位氨基酸）、pegfp-cenpe3（1200~2134位氨基酸）转染人胚肾293(hek293)细胞,采用受体漂白荧光共振能量转移方法（fret方法）,检测egfp-cenpe2、egfp-cenpe3和mps1间的能量转移率(ef),进一步用免疫共沉淀方法验证fret的实验结果。结果：重组质粒转染hek293细胞后经激光共聚焦显微镜观察重组质粒表达的融合蛋白与mps1都存在着共定位；fret检测结果显示egfp-cenpe3和mps1间的能量转移率为［(12.63±0.48)%,n=30］,pegfp-cenpe2和mps1间的能量转移率为［(3.07±0.21)%,n=30］，与对照组［(2.96±0.27)%,n=30］比较pegfp-cenpe3和mps1间的能量转移率差异存在显著性（p<0.05），免疫共沉淀实验结果显示egfp-cenpe3与mps1蛋白间存在相互作用。结论：fret技术和免疫共沉淀实验证明了egfp-cenpe3与mps1间存在着相互作用。