新型抗2-型糖尿病基因重组rmbay的克隆、表达及生产环节优化

利用基因重组方法构建rmbay的原核表达载体pky-bay，并研究其生产的优化条件。选用大肠杆菌偏爱密码子，用pcr方法合成全长rmbay多肽基因，并定向插入到高效表达载体pkyb-mcs中，用大肠杆菌er2566进行表达，融合蛋白经chitin-beads柱纯化后，结合在柱上的融合蛋白用β-巯基乙醇诱导蛋白内含肽的n端自动切割，释放目的肽，目的肽由质谱鉴定。实验结果表明：利用载体pky-b在大肠杆菌er2566中，rmbay能够实现高效表达；在优化的生产条件下，rmbay的产量可达到6.7mg/l发酵产物，纯度大于98%，质谱鉴定rmbay的分子量为3.887kda.与理论值相符合。