假密环菌cdna文库的构建及其阿拉伯糖苷酶基因的克隆(英文)

用smart技术构建了载体为λtriplex2的假密环菌的表达型cdna文库。文库滴度为1．0×106pfu／ml,重组率约为98．3％,扩增后滴度为3．1×108pfu／ml,容量约为4．2×1010。从文库中随机挑选176个克隆进行5’端测序,得到147条表达序列标签(est),并将测序结果提交到embl数据库。随机测序结果表明:插入片段长度均在200-800之间。测序结果经过生物信息学分析,发现有43条序列与已知序列有明显同源性,其中序列aj620046与多形拟杆菌的阿拉伯糖苷酶序列有很高的序列一致性。用smart-race技术成功获得了aj620046的全长cdna,克隆了aj620046的开放阅读框af,并成功构建了重组质粒phil-s1-af,在毕赤酵母菌中进行了初步表达。