重组人色素上皮细胞衍生因子融合蛋白的制备及其抑制新生血管

目的：人色素上皮细胞衍生因子(pigmentepithelium-derivedfactor,pedf)是一种有效的新生血管形成抑制因子和神经营养因子。本文通过原核细胞表达人pedf蛋白，鉴定其抑制新生血管的生物学活性。方法：采用pcr法扩增人pedfcdna，将其克隆到pet32a载体中，在大肠杆菌bl21中表达人pedf蛋白。经sds-page和western-blot鉴定后，镍柱亲和层析法变性条件下纯化重组融合蛋白。bradford法测蛋白浓度，采用鸡胚脲囊膜法测其对新生血管形成的影响。结果：成功构建了pet32a-pedf表达载体。重组人pedf蛋白在bl21宿主菌中获得了稳定高效表达，鸡胚脲囊膜实验结果显示在重组蛋白浓度为0.4、0.04ng/ml时均有对新生血管的显著抑制作用（p<0.01），而在4ng/ml时无抑制作用。结论：成功高效表达及纯化了重组人pedf蛋白，鉴定其抑制新生血管的生物学活性，并且证实该活性在一定范围内有效，为进一步研究其功能及推广应用奠定了基础。