集成干扰素突变体ⅱ的分子构建、表达及提纯

目的：通过定点突变，构建集成干扰素突变体ⅱ（ifn-con-m2），以期获得兼具高效作用和可定点聚乙二醇（peg）修饰的新型药物分子。方法：采用pcr体外定点突变技术，使集成干扰素突变体ⅰ（ifn-con-m1）基因的第86位密码子由tac突变为tgc。将扩增片段克隆入pet-23b表达载体，重组质粒转化大肠杆菌bl21（de3）。iptg诱导后，表达的ifn-con-m2经包含体变复性、疏水层析、deae层析和凝胶过滤层析等纯化后，用wish-vsv系统进行生物活性测定。结果：ifn-con-m2以包涵体形式表达，表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后，ifn-con-m2的纯度大于95%，比活性大于5.0×108iu/mg。结论：构建了ifn-con-m2的表达载体，并成功地在大肠杆菌中表达，获得了高活性突变分子ifn-con-m2，建立了ifn-con-m2的纯化工艺。