%0 Journal Article %T 集成干扰素突变体ⅱ的分子构建、表达及提纯 %A 牛晓霞 %A 刘金毅 %A 杨轶 %A 吴晓东 %J 中国生物工程杂志 %D 2006 %X 目的:通过定点突变,构建集成干扰素突变体ⅱ(ifn-con-m2),以期获得兼具高效作用和可定点聚乙二醇(peg)修饰的新型药物分子。方法:采用pcr体外定点突变技术,使集成干扰素突变体ⅰ(ifn-con-m1)基因的第86位密码子由tac突变为tgc。将扩增片段克隆入pet-23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌bl21(de3)。iptg诱导后,表达的ifn-con-m2经包含体变复性、疏水层析、deae层析和凝胶过滤层析等纯化后,用wish-vsv系统进行生物活性测定。结果:ifn-con-m2以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,ifn-con-m2的纯度大于95%,比活性大于5.0×108iu/mg。结论:构建了ifn-con-m2的表达载体,并成功地在大肠杆菌中表达,获得了高活性突变分子ifn-con-m2,建立了ifn-con-m2的纯化工艺。 %K 集成干扰素突变体 %K 定点突变 %K 构建 %K 表达 %K 纯化 %U http://159.226.100.150:8082/biotech/CN/abstract/abstract11552.shtml