胃癌细胞mgc-803耐药细胞株的建立及分泌蛋白差异分析

？目的：应用蛋白质组学技术系统比较5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂耐药细胞与敏感细胞的分泌蛋白表达谱，以期发现胃癌耐药相关分泌蛋白标志物，为临床选择有针对性的化疗药物提供依据。方法：通过药物梯度诱导建立胃癌mgc-803耐药细胞株。从培养上清中收集mgc-803亲代及耐药细胞的分泌蛋白，应用双向凝胶电泳（two-dimensionalgelelectrophoresis，2-de）进行分离，通过pdquest7.1.0软件分析获得差异蛋白，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assistedlaserdesorptionionizationtime-of-flightmassspectrometry，maldi-tof-ms）进行鉴定，并用实时定量pcr检测各差异蛋白在耐药细胞株和亲本细胞间mrna水平上的表达差异。结果：分别建立了对5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂耐药指数为110.6、70.0和13.3的耐药细胞株。顺铂耐药细胞对5-氟尿嘧啶和紫杉醇、5-氟尿嘧啶耐药细胞对紫杉醇均有较强的交叉耐药，前者耐药指数分别为23.5和114.0，后者为70.0。制备获得了耐药细胞培养上清的双向凝胶电泳蛋白组分图谱；经pdquest软件分析获得18个差异在2倍以上、3株耐药细胞培养上清中丰度均增高的蛋白点，其中13个得到了质谱鉴定，它们分别属于蛋白酶类、信号转导分子等。与亲本细胞相比，在mrna水平上，slmap、top3a、dync1h1、rhpn1、puf60和siah1在3种耐药细胞中皆有明显上调；ift172、filip在耐5-氟尿嘧啶和紫杉醇细胞中上调显著；plvap、lmna在耐紫杉醇及顺铂细胞中表达有所升高，但在耐5-氟尿嘧啶细胞中升高不显著。在蛋白水平上的进一步验证发现，siah1在3种耐药细胞中的表达量及培养上清中的含量皆有升高。结论：本研究以胃癌细胞mgc-803为亲本细胞分别建立了针对5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂的耐药细胞株，在此基础上应用双向电泳及蛋白质谱技术，整体展示了耐药细胞与亲本细胞的差异分泌蛋白，并发现siah1蛋白在耐药细胞总蛋白及培养上清中的含量均明显升高，其有可能成为研发胃癌血清耐药标志物的候选分子。