小鼠腔前卵泡三维培养成熟后受精体系的建立及优化

？目的：建立小鼠腔前卵泡体外海藻酸盐包埋培养的三维培养(3-dimensionsinvitrogrowth，3d-ivg)方法以及成熟卵母细胞体外受精体系。方法：采用机械法分离12日龄雌性昆明小鼠卵巢，获取结构完整的腔前卵泡，腔前卵泡经过包埋后体外立体化培养，激素超排，收集黏液化的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte-complex，cocs)，分别计数发泡期(germinalvesicle，gv)卵母细胞、生发泡破裂期(germinalvesiclebreakdown，gvbd)卵母细胞和含有第一极体(firstpolarbody，pb)卵母细胞，制备卵母细胞染色体并进行c带染色分析。同时设小鼠体内超排卵母细胞(invivoconvention，ivc)作为对照。再将体外培养成熟的卵母细胞与获能后的小鼠精子受精，观察受精情况。结果：经过3d-ivg，卵泡存活率为82.5%，卵泡发育过程维持完整的三维结构，卵泡直径增长迅速，培养6d后，有91.7%成腔；在激素超排后，有82.6%cocs黏液化。gv、gvbd和含有pb的成熟卵母细胞分别为6.1%，45.4%和48.5%。3d-ivg获得的成熟卵母细胞百分率(48.5%)明显低于体内超排成熟卵母细胞百分率(82.9%)，差异有统计学意义(p<0.05)。但3d-ivg所获得的卵母细胞染色体c带分析表明染色体数目为20条，结构未见异常，与体内超排卵母细胞一致。并观察到3d-ivg培养成熟的卵母细胞可以受精成功。结论：建立并完善了小鼠腔前卵泡的三维体外培养体系，为生殖毒性实验研究和胚胎工程研究提供了新的方法。