pires2-egfp-daz3质粒构建及金黄地鼠2-细胞胚中人daz基因的复制与表达

？背景与目的：人yq11.2上azf区(内含daz基因家族)的缺失是多数男性不育的病因。本研究旨在探讨daz3基因导入精子的可能性以及导入基因在2-细胞胚中的功能。材料与方法：构建pires2-egfp-daz3质粒，经鉴定无误后将其导入金黄地鼠精子。将携带daz3基因的精子与金黄地鼠卵母细胞进行体外受精。用fish、pcr、rt-pcr技术分别检测daz3基因在精子头部、雄原核上的整合以及在2-细胞胚中的复制与表达。结果：构建的pires2-egfp-daz3质粒经酶切、pcr和绿色荧光蛋白表达鉴定构建成功。采用fish在精子头部、单细胞胚雄原核和2-细胞胚两个间期核上观察到阳性杂交信号。采用rt-pcr在2-细胞胚样本中观察到daz3cdna的特异条带。结论：外源性daz3基因能被导入精子基因组。携带daz3基因的精子可与卵母细胞完成正常的受精过程。导入的daz3基因在早期胚胎细胞中能够随细胞分裂自我复制并表达其功能。本研究结果为daz基因缺失所致男性不育的治疗提供了新的线索。