pcegr-ifnγ重组质粒的构建与体外x射线诱导表达特性

？目的：扩增小鼠ifnγcdna全长并构建pcegr-ifnγ重组质粒，研究该重组质粒在不同剂量x射线作用下在b16细胞中的表达及时程。方法：利用pcr方法扩增小鼠ifnγcdna全长，插入pcdna3.1质粒的多克隆位点，用egr-1的启动子替代pcdna3.1质粒的cmv启动子，构建成pcegr-ifnγ重组质粒；通过脂质体转染法将重组质粒转染入b16细胞，利用elisa试剂盒检测在不同剂量x射线作用下，重组质粒的表达量及表达时程。结果：ifnγcdna的扩增产物经测序，结果基本与已知序列相符，重组质粒经酶切鉴定，得出相应的特异带。不同剂量x射线照射后，pcegr-ifnγ在b16细胞中表达量为77.73～94.60pg/ml，明显高于对照组(p<0.05～p<0.01)；2gyx射线照射后6h，pcegr-ifnγ表达量最高，为90.00pg/ml，明显高于对照组(p<0.001)。结论：用本实验克隆的ifnγcdna所构建的pcegr-ifnγ重组质粒，经x射线的诱导，在被转染的b16细胞中表达量明显增高。对重组质粒x射线诱导表达的剂量时程的检测，为将来pcegr-ifnγ基因治疗合并放疗的体内研究奠定了基础。