嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶基因pera在大肠杆菌中的高效表达

摘要利用pcr技术得到嗜热脂肪芽孢杆菌（bacillusstearothermophilus）过氧化氢酶基因pera，将该基因与表达载体pkk223？3连接构建重组质粒pk？pera，转化大肠杆菌过氧化氢酶hpⅰ和hpⅱ双缺突变株um2，得到重组大肠杆菌um2？1.酶活测定结果表明，表达产物具有正常的生物学活性.sds？page电泳结果显示出明显的特异性表达条带，单体mr=86×103，与嗜热脂肪芽孢杆菌所产酶相同.实验表明，重组质粒在宿主um2中有较好的稳定性，在无选择压力条件下传代60次基本保持稳定，传代100次重组质粒保留80%以上.摇瓶实验确定重组菌的最佳表达条件为：iptg浓度,0.75mmol/l；诱导时间3h；培养基起始ph6.5；诱导温度37℃；装液量50ml/250ml.在优化条件下，重组菌产生的过氧化氢酶占菌体总蛋白的8%，酶活力可达35u/ml，是原始菌株bacillusstearothermophilusiam11001的11.7倍.图2表1参10