%0 Journal Article %T 嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶基因pera在大肠杆菌中的高效表达 %A 王凡强 %A 王正祥 %A 邵蔚蓝 %A 刘吉泉 %A 徐成勇 %A 诸葛健 %J 应用与环境生物学报 %P 219-222 %D 2002 %X 摘要利用pcr技术得到嗜热脂肪芽孢杆菌(bacillusstearothermophilus)过氧化氢酶基因pera,将该基因与表达载体pkk223?3连接构建重组质粒pk?pera,转化大肠杆菌过氧化氢酶hpⅰ和hpⅱ双缺突变株um2,得到重组大肠杆菌um2?1.酶活测定结果表明,表达产物具有正常的生物学活性.sds?page电泳结果显示出明显的特异性表达条带,单体mr=86×103,与嗜热脂肪芽孢杆菌所产酶相同.实验表明,重组质粒在宿主um2中有较好的稳定性,在无选择压力条件下传代60次基本保持稳定,传代100次重组质粒保留80%以上.摇瓶实验确定重组菌的最佳表达条件为:iptg浓度,0.75mmol/l;诱导时间3h;培养基起始ph6.5;诱导温度37℃;装液量50ml/250ml.在优化条件下,重组菌产生的过氧化氢酶占菌体总蛋白的8%,酶活力可达35u/ml,是原始菌株bacillusstearothermophilusiam11001的11.7倍.图2表1参10 %K 关键词嗜热脂肪芽孢杆菌 %K 过氧化氢酶 %K 表达 %U http://www.cibj.com/oa/DArticle.aspx?type=view&id=186