甲基对硫磷降解菌gfp标记菌株的构建

摘要用sau3aⅰ酶切甲基对硫磷降解菌dll？1总dna，与bamhⅰ酶切的启动子探针载体probe-gfp酶连，转化e.colidh5α，在选择性平板lb（ampr）上从大约1×104个菌落筛选到50个含启动子片断的阳性克隆.挑选其中一个阳性克隆，将启动子片断克隆到pij2925和pbbr-mcs2上构建成重组质粒pijgfp和广宿主标记载体pbbrgfp.然后将pijgfp载体上的启动子片断克隆到广宿主载体ptr102上，获得第二个广宿主标记载体ptrgfp.将ptrgfp和pbbrgfp通过三亲接合分别标记于dll？1得到两株标记菌，即dlltr和dllbr.通过激光共聚焦显微镜观察和软件lasersharpversion3.2分析发现ptrgfp在e.coli中表达很强而在dll？1中表达很弱，而pbbrgfp正好相反.图5表2参12