肠出血型大肠埃希菌o157:h7espf基因缺失株和回补株的构建

目的利用red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的espf基因及其核苷酸片段；建立以pbad33质粒为载体的espf基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段，将抗性打靶片段电转入含有pkd46质粒的edl933w，在pkd46介导的重组系统帮助下，打靶片段和菌体espf基因发生同源重组，pcr和测序验证；pcr扩增espf及其核苷酸片段的整个orf区序列，将其克隆入pbad33质粒，分别将重组质粒转入相应的缺失株，以构建出相应的回补突变株。采用rt-pcr的方法验证在相应的回补突变株中espf及其核苷酸片段是否转录。结果构建了espf基因及其核苷酸片段缺失的eheco157:h7edl933w突变菌株和相应的回补株，且espf基因及其核苷酸片段在回补株中均发生转录。结论本研究运用red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌o157:h7espf基因缺失株，并建立以pbad33质粒为载体的eheco157:h7基因回补方法，为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中espf基因的调控机制奠定了基础。