%0 Journal Article %T 肠出血型大肠埃希菌o157:h7espf基因缺失株和回补株的构建 %A 华颖 %A 孙琦 %A 王湘雨 %A 杜艳丽 %A 邵娜 %A 张其威 %A 赵卫 %A 万成松 %J 南方医科大学学报 %D 2015 %X 目的利用red同源重组系统敲除肠出血型大肠埃希菌的espf基因及其核苷酸片段;建立以pbad33质粒为载体的espf基因回补实验平台。方法设计1对同源臂引物扩增卡那霉素抗性打靶片段,将抗性打靶片段电转入含有pkd46质粒的edl933w,在pkd46介导的重组系统帮助下,打靶片段和菌体espf基因发生同源重组,pcr和测序验证;pcr扩增espf及其核苷酸片段的整个orf区序列,将其克隆入pbad33质粒,分别将重组质粒转入相应的缺失株,以构建出相应的回补突变株。采用rt-pcr的方法验证在相应的回补突变株中espf及其核苷酸片段是否转录。结果构建了espf基因及其核苷酸片段缺失的eheco157:h7edl933w突变菌株和相应的回补株,且espf基因及其核苷酸片段在回补株中均发生转录。结论本研究运用red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌o157:h7espf基因缺失株,并建立以pbad33质粒为载体的eheco157:h7基因回补方法,为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中espf基因的调控机制奠定了基础。 %K 大肠埃希菌 %K espf基因 %K 同源重组 %K 突变株 %K 基因回补 %U http://www.j-smu.com/oa/darticle.aspx?type=view&id=2015111546