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ISSN: 2333-9721
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人神经营养因子-3基因的亚克隆及其基因工程细胞模型的建立

, PP. 805-808

Keywords: 神经营养因子-3/分泌,骨髓间充质干细胞/遗传学,转染

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Abstract:

目的亚克隆人神经营养因子-3(humanneurotrophin-3,nt3)并转染至体外培养的人骨髓间充质干细胞(bm-mscs),建立能够表达和分泌nt3的基因工程细胞模型。方法采用低糖dmem培养液+10%胎牛血清体外培养bm-mscs,流式细胞仪分析其表面标记;构建真核表达载体pcdna3.1(+)/nt3并通过脂质体介导转染bm-mscs;收集部分细胞提取其中的总rna,经逆转录pcr检测nt3基因表达;利用培养上清液体外孵育毛细胞以鉴定其生物学活性。结果bm-mscs表达cd13、cd29、cd59,不表达cd11、cd14、cd31、cd34、cd45、cd80、cd86、cd117、hla-dr;pcdna3.1(+)/nt3转染bm-mscs后,能够表达和分泌nt3,并具有生物学活性,可促进离体的豚鼠耳蜗毛细胞存活。结论在体外建立表达nt3基因并分泌nt3的基因工程细胞是可行的。

References

[1]  ernforsp,vandw,loringj,etal.complementaryrolesofbdnfandnt-3investibularandauditorydevelopment[j].neuron,1995,14(6):1153-64.
[2]  moraymar,troyl,toddl,etal.purificationandexvivoexpansionofpostnatalhumanmarrowmesodermalprogenitorcells[j].blood,2001,98(9):2615-25.
[3]  汪谦.现代医学实验方法[m].北京:人民卫生出版社,1997.143.
[4]  萨姆布鲁克j,弗里奇ef,曼尼阿蒂斯著t著.金冬雁,黎孟枫,译.分子克隆实验指南[m].第2版,北京:科学出版社,1992.
[5]  ruanrs,leongsk,marki,etal.effectsofbdnfandnt-3onhaircellsurvivalinguineapigcochleadamagedbykanamycintreatment[j].neuroreport,1999,10(10):2067-71.
[6]  agermank,canlonb,duanm,etal.neurotrophins,nmdareceptors,andnitricoxideindevelopmentandprotectionoftheauditorysystem[j].annnyacadsci,1999,28,884:131-42.
[7]  staeckerh,gabaizadehr,federoffh,etal.brain-derivedneurotrophicfactorgenetherapypreventsspiralgangliondegenerationafterhaircellloss[j].otolaryngolheadnecksurg,1998,119(1):7-13.
[8]  jukkay,ullap,maximm,etal.expressionpatternsofneurotrophinandtheirreceptormrnasintheratinnerear[j].hearres,1993,65(1):69-78.
[9]  路艳蒙,傅文玉,朴英杰.人骨髓间充质干细胞的培养及性质鉴定[j].第一军医大学学报,2001,21(8):571-3.luym,fuwy,piaoyj.cultureandidentificationofhumanmesenchymalstemcells[j].jfirstmilmedunir/diyijunyidaxuexuebao,2001,21(8):571-3.
[10]  pittengermf,mackayam,becksc,etal.multilineagepotentialofadulthumanmesenchymalstemcells.science[j].1999,284(5411):143-7.
[11]  金丹,裴国献,王珂,等.hbmp-7基因转染对骨髓间充质干细胞增殖和碱性磷酸酶合成的影响[j].中国医学科学院学报(actaacadmedsin),2003,25(1):22-5.
[12]  金丹,曾位森,裴国献,等.经转染人骨形态发生蛋白7基因后bmscmrna的表达[j].第一军医大学学报.2002,22(3):22-4.jind,zengws,peigx,etal.expressionofhumanbonemorphogeneticprotein7mrnaafterthegenetransfectioninrabbitbonemarrow-derivedmesenchymalstemcells[j].jfirstmilmeduniv/diyijunyidaxuexuebao,2002,22(3):22-4.
[13]  vandw,staeckerh,haltermanmw,etal.genetherapyintheinnerear.mechanismsandclinicalimplication[j].annnyacadsci,1999,884:345-60.
[14]  cornettak,morganra,andersonwf.safetyissuesrelatedtoretroviral-mediatedgenetransferinhuman[j].humangenether,1991,2(1):5-14.
[15]  likj,dilberms,abedimr,etal.retroviral-mediatedgenetransferintohumanbonemarrowstromalcells:studiesofefficiencyandinvivosurvivalinscidmice[j].eurjhaematol,1995,55(5):302-6.
[16]  congetpa,minguelljj.phenotypicalandfunctionalpropertiesofhumanbonemarrowmesenchymalprogenitorcells[j].jcellphysiol,1999,181(1):67-73.

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