副溶血弧菌基因回补实验方法的建立与应用

目的建立以pbad33质粒为载体的副溶血弧菌（vibrioparahaemolyticus,vp）基因回补实验平台。方法pcr扩增apha和opar的整个orf区序列，并将其直接克隆入pbad33质粒中，构建重组质粒。分别将重组质粒转入到δopar和δapha中（分别代表opar和apha的突变株），以构建出相应的回补株c-δapha和c-δopar。分别在apha和opar基因内设计特异性引物，采用rt-pcr方法，验证在相应的回补突变株中apha和opar是否转录。利用引物延伸实验研究野生株（wt）、δopar、δapha、c-δapha和c-δopar中mfpa（apha负调控，opar正调控其表达）的相对rna水平。结果apha和opar在相应的回补株中发生转录；且mrna水平与野生株一致。结论成功建立了以pbad33质粒为载体的vp基因回补方法，并得到应用。