细胞角蛋白8gfp/puro双标干涉慢病毒系统的构建及对细胞凋亡的影响

：目的构建细胞角蛋白8（ck8）的双标慢病毒干涉载体，获得高滴度慢病毒颗粒，感染hct116细胞建立稳定株，检测ck8敲低对细胞凋亡的影响。方法将ck8的sirna序列插入慢病毒表达载体gv248，并与包装质粒pmd、spa共转染293t细胞，36、48h分两次收集慢病毒上清，应用流式细胞术检测病毒滴度。获得的病毒感染hct116细胞，用嘌呤霉素筛选阳性细胞，westernblotting检测干涉效果。采用annexinv/pi染色检测干涉ck8对化疗药物顺铂诱导的细胞凋亡的影响。结果与结论成功构建ck8干涉慢病毒载体并得到干涉稳定株，在hct116细胞中干涉ck8使细胞对顺铂引起的凋亡更加敏感。