肠出血型大肠埃希菌o157:h7ppk基因缺失株的构建及其生物学特性分析

目的利用red重组系统构建肠出血型大肠埃希菌（ehec）o157:h7ppk基因缺失株,并研究其生物特性。方法设计并合成一对同源臂引物，每条引物5’端与ppk基因同源，3’端与卡那霉素抗性基因同源，扩增卡那霉素抗性基因片段；制备含有pkd46质粒的eheco157:h7edl933w感受态细菌，然后将该抗性基因片段电击转化入制备的感受态菌株中；利用pkd46介导的red重组系统，通过同源重组替换eheco157:h7edl933wppk基因，pcr和测序验证；通过革兰染色、测d600值、吉姆萨染色比较eheco157:h7edl933w野生株和突变株的形态结构、生长能力和黏附性。结果构建了ppk基因缺失并含有卡那霉素抗性的eheco157:h7edl933w突变菌株（eheco157:h7edl933wδppk），初步探索了eheco157:h7edl933w野生株和突变株的生物学特性。结论本研究运用red重组系统构建了肠出血型大肠埃希菌o157:h7ppk基因缺失株，为进一步研究肠出血型大肠埃希菌中ppk基因的调控机制奠定了基础。