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南方医科大学学报 2006
hbv全基因c区突变株在永生化b淋巴母细胞系中的稳定表达, PP. 725-729 Keywords: 乙型肝炎病毒,变异,真核细胞表达载体,永生化b淋巴母细胞 Abstract: 目的构建携带v60、g87和l97突变位点的hbv全基因组真核表达载体,转染慢性hbv感染者永生化b淋巴母细胞系(lcls)。方法用定点突变技术将hbvp3.8ⅱ质粒c基因区3个氨基酸v60、g87、l97进行突变(p3.8ⅱ-v60,g87,l97),转化e.coli.xl1-blue感受态细胞扩增筛选,用限制性内切酶sacⅰ和kpnⅰ分别将野生型和突变型p3.8ⅱ质粒进行双酶切,插入ebv-plpp真核细胞表达载体,转染lcls,潮霉素稳定筛选后,鉴定目的基因在转染细胞能够稳定表达。结果与结论dna序列分析表明,野型hbvdna核心区第60、87、97位氨基酸发生了预期的突变,westernblotting和微粒子免疫荧光法证明转染的lcls能稳定表达hbv抗原,证实成功构建了预期细胞模型。?
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