奶山羊pou1f1基因cds区的克隆、分析及原核表达

【目的】克隆奶山羊垂体特异性转录因子pou1f1基因cds区，并对其进行生物信息学分析和原核表达。【方法】采集关中奶山羊垂体组织，提取其总rna，根据绵羊pou1f1基因序列，利用反转录rt-pcr克隆pou1f1基因cds区，对其进行生物信息学分析，并构建原核表达载体pet-32a-pou1f1，在大肠杆菌bl21（de3）plyss中进行表达。【结果】关中奶山羊pou1f1基因（genbank登陆号：fj547813）开放读码框由876个碱基组成，编码291个氨基酸，基中包含１个pou-specific结构域（从第124～198个氨基酸）和１个homeobox结构域（从第214～276个氨基酸）；奶山羊pou1f1基因cds区核苷酸序列与绵羊（nm_001009350）、牛（nm_174579）、人（nm_000306）和小鼠（nm_008849）的同源性分别为98%，97%，91%和86%，其氨基酸序列与绵羊、牛、人和小鼠的同源性分别为98%，98%，96%和92%；成功构建了重组质粒pet-32a-pou1f1的原核表达系统，并在体外条件下诱导表达出融合蛋白his-pou1f1。【结论】pou1f1基因编码的功能氨基酸在奶山羊、绵羊、牛、人和小鼠上高度保守，推测奶山羊pou1f1基因与其他物种的pou1f1基因具有相似的功能。