山葡萄vacbf1转录因子基因的克隆与表达分析

【目的】克隆山葡萄(vitisamurensis)cbf1转录因子基因(vacbf1)，为其功能的深入研究及其在植物抗寒基因工程中的应用奠定基础。【方法】根据植物cbf基因ap2/erebp保守区设计1对简并引物，利用pcr法从山葡萄cdna中扩增vacbf1基因的中间片段。再根据中间片段区域设计2对特异引物，采用反向pcr法扩增vacbf1基因的5′端和3′端序列。将中间片段与5′端和3′端序列拼接后得到山葡萄vacbf1基因的cdna全长序列，据此设计1对特异引物，pcr扩增vacbf1基因编码区的全长序列，并对其进行生物信息学分析。同时，利用荧光定量pcr分析山葡萄vacbf1基因在不同逆境胁迫(干旱、低温、盐胁迫)下的表达情况。【结果】成功地从山葡萄中克隆得到vacbf1基因cdna全长序列，其长度为762bp，编码253个氨基酸，在genbank注册号为dq517296。同源性分析证实，vacbf1属于cbf转录因子家族。荧光定量pcr分析发现，低温胁迫可以诱导山葡萄vacbf1基因高表达，而该基因的表达不受盐及干旱处理诱导。【结论】首次从山葡萄中克隆了vacbf1基因，并证实该基因参与了植物对低温胁迫的应答。