靶向猪瘟病毒ns3基因shrna干扰载体的构建与鉴定

利用rna干扰在线生物学软件分析猪瘟病毒ns3基因，设计针对ns3基因不同位置的小发卡rna（shorthairpinrna，shrna）干扰序列（其结构特征为正链（19nt）-环（9nt）-负链（19nt））。化学合成这些序列，并退火连接为双链干扰片段，将双链干扰片段定向克隆到干扰载体中，构建重组载体pgene-ns3-1，pgene-ns3-2和pgene-ns3-3，转化dh5a大肠杆菌感受态细胞，对转化产物进行kan＋筛选，碱裂解法提取重组质粒，将酶切鉴定为阳性的质粒测序。结果显示，双链干扰片段克隆方向正确，序列中未出现核苷酸的插入，缺失等突变现象。表明靶向猪瘟病毒ns3基因shrna干扰载体构建成功。