牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌双重pcr检测方法的建立

【目的】建立牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌的双重pcr检测方法。【方法】根据布鲁氏菌is711序列和单增李斯特菌毒力因子hlya序列设计并合成引物，建立双重pcr检测方法，对其特异性、敏感性和重复性进行检测，并制备污染模型乳，通过直接检测、增菌后检测、细菌富集后增菌检测，确定最低检测限。【结果】建立了牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌双重pcr检测方法，该方法特异性好、敏感性高、可重复性好。布鲁氏菌和单增李斯特菌单pcr检测最小dna质量浓度分别为0.282和3.33pg/μl，双重pcr检测最小dna质量浓度分别为2.82和33.3pg/μl。感染模型乳不经过增菌，布鲁氏菌和单增李斯特菌最低检测限分别为104和8×104cfu/ml；经过24h增菌，就可以检测到10cfu/ml的布鲁氏菌，经过12h增菌，就可以检测到8cfu/ml的单增李斯特菌；经过离心法富集细菌后再增菌，灵敏度可以扩大40～50倍，布鲁氏菌经24h增菌后最低检测限为10cfu/40ml，单增李斯特菌经12h增菌后最低检测限为8cfu/40ml。【结论】建立的双重pcr检测方法特异、灵敏、可重复，可单独或同时检测牛奶中的布鲁氏菌和单增李斯特菌，也可以用于其他产品中布鲁氏菌和单增李斯特菌的检测。