鸡传染性法氏囊病病毒bj-10株vp2基因的克隆及原核表达

【目的】克隆鸡传染性法氏囊病病毒(ibdv)bj-10株vp2基因，构建其原核表达载体，并在大肠埃希菌中进行高效表达。【方法】根据ibdvvp2基因序列设计1对特异性引物，应用rt-pcr技术克隆ibdvbj-10株vp2基因；将目的基因插入pmd18-t连接载体，筛选出阳性重组质粒；将该质粒克隆至原核表达载体pet-32α中，转化入jm109，经iptg诱导表达，对产物进行sds-page电泳分析，确定iptg的最佳诱导表达时间和浓度。【结果】克隆到了全长1356bp的ibdvbj-10株vp2基因；pcr、酶切鉴定分析表明，成功构建了重组质粒pet-32α-vp2；sds-page电泳分析表明，在宿主菌jm109中成功表达了约为60ku的vp2蛋白；iptg诱导表达时间以4.5h为宜，诱导最佳浓度为0.8mmol/l。【结论】成功克隆了ibdvbj-10株vp2基因，并在大肠埃希菌中表达了vp2蛋白。