兔出血症病毒vpg蛋白的原核表达及抗体制备

【目的】构建重组兔出血症病毒(rabbithemorrhagicdiseasevirus，rhdv)vpg(viralproteingenome-linked，vpg)蛋白基因的原核表达质粒,在大肠杆菌bl21(de3)中表达和纯化vpg蛋白，制备多克隆抗体，并检测抗体的基本特性。【方法】用pcr方法扩增rhdvvpg基因，将其克隆至原核表达载体pet-30a(+)中，转化大肠杆菌bl21(de3)菌株，用iptg诱导，使之重组表达vpg蛋白，并用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白。pcr扩增获得了345bp的vpg基因，用纯化的重组vpg蛋白免疫试验兔，制备抗vpg的多克隆抗体，用westernblot检测其特异性。【结果】构建了pet-30a/vpg原核表达质粒，转化大肠杆菌bl21（de3）菌株后，成功表达了vpg蛋白。用该蛋白免疫试验兔后，制备的多克隆抗体能与vpg蛋白特异性反应。【结论】成功表达了rhdvvpg蛋白，并制备了特异性良好的多克隆抗体。