人类胚胎干细胞与小鼠囊胚嵌合的探讨

【目的】探讨人类胚胎干细胞（humanembryonicstemcells,hescs）能否在小鼠胚胎环境中生存并参与其各个组织器官的分化，为hescs与小鼠囊胚嵌合的可行性研究提供依据。【方法】将154枚受精后3.5d（3.5dayspostcoitum,3.5dpc）icr品系小鼠囊胚随机分为3组：试验组(注射hescs)、模拟注射组（注射针仅刺破透明带及滋养层细胞，但不注射细胞和溶液）及对照组（未注射），于注射后培养24h统计囊胚完全孵化率。将稳定转染增强绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein,egfp）的含有9～15个hescs的小细胞团块，显微注射入3.5dpcicr品系小鼠囊胚腔内，注射后分别于3，24，48，69,77，94和116h，在普通荧光显微镜下观察egfp阳性细胞的定位与动态分布情况，并将嵌合体胚胎移植入假孕母鼠子宫内，分别于移植后第4天和第6天处死孕鼠，普通荧光显微镜下观察egfp阳性细胞在整个小鼠胚胎中的分布情况。【结果】注射后24h，试验组和模拟注射组的囊胚完全孵化率分别为73.6%和77.1%，均极显著高于对照组（38.3%）（p<0.01），有88.9%（32/36）的胚胎中的hescs迁移并定位在小鼠内细胞团（icm）及其临近的滋养层细胞上；体外培养48h后，egfp阳性细胞数进一步减少；116h后，只有1枚胚胎仍残留3～4个egfp阳性细胞，且散在分布于icm克隆之外。体内发育试验结果显示，将43枚注射后的嵌合体囊胚移植入6只代孕母鼠子宫内，获得了22枚脱膜，有17枚脱膜中含有胚胎，其中形态正常胎儿14枚，没有胚胎含有egfp阳性细胞。【结论】hescs很难与小鼠囊胚正常嵌合。