日本血吸虫β-catenin基因的克隆及在不同发育阶段的表达水平

【目的】分析β-连环蛋白（β-catenin）在不同发育阶段日本血吸虫体内的表达特征，为研究wnt/β-catenin信号通路对虫体发育的调控奠定基础。【方法】以7d童虫cdna为模板，通过race技术获得日本血吸虫β-catenin基因全长cdna序列。采用实时定量pcr分析该基因mrna在不同发育阶段日本血吸虫体内表达水平的变化。以含有多个抗原表位的β-catenin部分cdna序列为模板，构建原核pet28a-β-catenin-310重组质粒，表达β-catenin蛋白。以纯化的原核表达产物为抗原，免疫balb/c小鼠制备抗血清，以此抗血清为一抗，通过westernblotting分析β-catenin蛋白在不同发育阶段日本血吸虫体内表达量的变化。【结果】β-catenincdna（genbank登陆号gu570442）序列全长2354bp，含完整的开放阅读框，编码671个氨基酸。β-catenin基因mrna表达水平在虫卵中最高，23d雌虫次之，在13d童虫和23d雄虫中也较高，约是23d雌虫的一半，在其他发育阶段mrna的表达水平相对较低。构建的重组质粒以包涵体形式表达β-catenin重组蛋白，该蛋白有很好的免疫原性。在日本血吸虫不同发育阶段β-catenin蛋白表达量的变化趋势与β-cateninmrna表达水平的变化基本一致。【结论】不同发育阶段日本血吸虫β-catenin基因mrna表达水平与β-catenin蛋白表达水平变化趋势基本一致；结合日本血吸虫发育特征，推测wnt/β-catenin信号通路可能对虫体的器官分化、虫卵的形成及卵胚发育等过程起着重要的调控作用。