棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶的原核表达及其协同增效作用

【目的】在大肠杆菌中表达棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒（hearnpv）几丁质酶（chia），利用表达产物进行病毒增效作用研究，以明确杆状病毒chia对hearnpv的协同增效作用。【方法】用pcr方法扩增出不含n端信号肽编码序列的chia基因片段,分别克隆至原核表达载体pmal-p2x和pet-32a中,构建重组表达载体，并分别在大肠杆菌tb1和bl21(de3)中进行融合表达，测定融合蛋白对hearnpv的增效作用。【结果】克隆的基因片段经过测序后连接表达载体，成功构建了重组表达载体pmal-p2x-chia和pet-32a-chia。重组载体转化相应菌株并进行诱导表达，发现pmal-p2x-chia在大肠杆菌tb1中的表达量占细菌总蛋白的15.8%，其中20.0%为可溶性表达；pet-32a-chia在bl21(de3)中的表达量占细菌总蛋白的26.8%，其中30.2%为可溶性表达。选用pet-32a-chia在bl21(de3)中的表达产物作为增效蛋白，当表达的可溶性hearnpvchia的添加水平为1.0μg/ml时，其能够显著提高病毒毒力，棉铃虫的死亡率较对照提高36.6%。【结论】利用大肠杆菌表达的可溶性hearnpvchia，对hearnpv具有明显的增效作用。