一种新型dna标记技术——限制性位点扩增多态性(rsap)的建立与优化

了避开基于限制性酶切位点分子标记技术的dna酶切环节，简化其复杂的程序，试验以辣椒为材料，建立了一种新型dna标记技术——限制性位点扩增多态性（rsap），并对其反应体系进行了优化，对rsap适用性、重复性进行了检验。结果显示，rsap技术的引物为2条长度均为18bp的引物，引物的3’端为4～6个碱基的限制性酶切位点序列，接着是12～14个碱基的随机序列，2条引物的限制性位点和随机序列不同；pcr扩增的前5个循环采用35℃的退火温度，随后的35个循环采用48℃的退火温度；在25μl反应体系中，模板dna用量为20ng，mg2＋浓度为2.5mmol/l，dntps浓度为0.2mmol/l，taqdna聚合酶用量为1.5u，2条引物浓度均为600nmol/l;rsap技术重复性好，适用性广泛，是一种操作简便、产率中等、稳定可靠的dna标记技术。