小鼠trim59蛋白多克隆抗体的制备、鉴定与初步应用

【目的】制备兔抗鼠三结构域蛋白59（tripartite-motif-containing59,trim59）多克隆抗体。【方法】利用pcr方法得到小鼠trim59基因片段，将其克隆至pgex-2t原核表达载体中，转入大肠杆菌bl21，iptg诱导表达gst-trim59融合蛋白。gst-trim59融合蛋白经亲和层析纯化浓缩后免疫新西兰大耳白兔，制备多克隆抗体，通过elisa测定兔抗鼠trim59多克隆抗体效价，用westernblot测定其特异性。用免疫组织化学方法检测trim59在小鼠前列腺癌组织中的表达。【结果】成功构建了pgex-2t-trim59原核表达重组质粒，并诱导表达出gst-trim59融合蛋白，免疫新西兰大耳白兔5周后获得多克隆抗体。elisa测定结果表明，trim59多克隆抗体效价为1∶106以上；westernblot分析表明，trim59多克隆抗体具有良好的特异性。免疫组织化学检测发现，trim59在小鼠前列腺癌组织细胞中高表达。【结论】成功地制备了特异性良好的兔抗鼠trim59多克隆抗体，其具有良好的免疫学活性，能够用于相关研究。