抗cmv和tomvrnai载体的构建及加工番茄遗传转化

【目的】利用农杆菌介导法将抗cmv和tomv的rnai表达载体pbi35stc12转入红番3号加工番茄，获得抗cmv和tomv的加工番茄植株，为加工番茄病毒病的防治奠定基础。【方法】采用rt-pcr扩增，选取新疆加工番茄cmv分离物ns041a复制酶第1051-1350bp序列和tomv分离物scs-2130/180ku复制酶第1920-2200bp序列，作为干扰片段cr12和to12。通过t克隆载体将cr12和to12连接成拼接片段tc12，构建成含反向重复结构拼接片段的rnai表达载体pbi35stc12。通过农杆菌介导法，用其转化红番3号加工番茄，经过筛选、pcr检测得到转基因植株。【结果】成功构建了抗cmv和tomv的rnai表达载体pbi35stc12，并用其转化番茄植株，从转化的1500个愈伤组织中获得33株再生植株，利用pcr对再生植株进行检测，显示从33株再生植株中获得了19株转基因植株，转化率为1.26%。【结论】构建了抗cmv和tomv的rnai表达载体pbi35stc12，用其转化红番3号加工番茄，获得了转基因植株。