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西北农林科技大学学报(自然科学版) 2008
桔梗rapd-pcr体系的正交优化及引物筛选, PP. 193-198 Keywords: 桔梗,rapd,体系优化,正交设计,引物筛选 Abstract: [目的]建立桔梗rapd-pcr反应的最佳体系并应用于桔梗遗传图谱的构建.[方法]以2个桔梗亲本gs16和gs106的叶片dna为模板,对桔梗dna的提取及对影响桔梗rapd-pcr扩增的重要参数进行优化试验,并从530个随机引物中筛选出在2个亲本间具多态性的引物.[结果]叶片研磨后用蒸馏水预洗及2次沉淀时加入3mol/lnacl(ph5.2)溶液,提取的基因组dna纯度较高.优化的最佳反应体系总体积为25μl.内含ddh2o12.4μl、10×buffer2.5μl、引物0.3μmol/l、dntps200μmol/l、mg2+2.5mmol/l、taqdna聚合酶0.5u、dna模板40ng;反应程序为:94℃预变性4min;94℃30s,35.3℃1min,72℃2min,40次循环;72℃10min.按此优化rapd条件成功地从530个随机引物中筛选出了115个在两亲本间具多态性的引物.[结论]改良的ctab法能成功用于桔梗基因组dna提取,建立的最佳反应体系可用于桔梗遗传图谱的构建.
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