人胰岛素样生长因子-ⅰ基因农杆菌工程菌株的构建

采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子-ⅰ(huigf-1)基因的4条寡核苷酸片段，再通过片段1，2与3，4末端互补配对和klenow酶促补平及酶切连接成为完整的huifg-idna片段，用ecorⅰ/pstⅰ酶切后克隆于pgemt-easyvector，经测序证明所得dna序列与设计的序列完全一致，选用植物偏爱密码子校正了启始密码子atg下游的6个密码子，并在atg处增加kozak序列后，插入pbi121的bamhⅰ/sacⅰ位点，构建了以35s为启动子的植物表达载体，以hindⅱ/ecorⅰ切下35s－kozak-igf-ⅰ-nos(ter)。插入pcambia2300之hindⅲ/ecorⅰ位点，构建成huigf-1植物表达载体，通过cacl2直接转化法将表达载体导入农杆菌eha105（rif.r)，并以菌落原位杂交技术和dnadotblot对重组农杆菌进行了筛选，所获得的重组农杆菌菌培养huigf-i药用植物奠定地基础。