浓缩苹果汁中扩展青霉菌实时pcr快速检测条件的优化

为了研究苹果汁生产中棒曲霉素产生菌的快速检测,利用实时pcr方法快速检测扩展青霉的可能性,对扩增条件进行优化。在polygatacturonase基因引物设计和传统pcr扩增扩展青霉dna的基础上,研究实时pcr扩增时退火温度、引物浓度以及底物质量浓度对扩增效果的影响,以获得最佳的参数。结果表明,用lightercy-cler实时pcr扩增扩展青霉dna的最佳退火温度为61℃,最佳引物浓度为0.20～0.40μmol/l,底物质量浓度对实时pcr扩增的影响较小。在以上参数下,可以获得良好的pcr扩增曲线、产物溶解曲线以及清晰的产物条带。研究获得的快速检测扩展青霉的实时pcr参数,可用于浓缩苹果汁工业化生产中扩展青霉的快速检测,也可作为其他微生物实时pcr检测时的方法学参考。