牛ipscs向神经细胞的诱导分化

【目的】通过类胚体介导体外自由分化与诱导分化，验证所建立的牛诱导性多能干细胞（bovineinducedpluripotentstemcells,bipscs）能否分化为外胚层的神经细胞。【方法】将bipscs悬浮培养以制备类胚体，通过类胚体介导使bipscs在添加全反式维甲酸（ra）和β巯基乙醇（β-me）诱导体系中分化为神经细胞，比较其诱导效率；提取不同诱导体系的分化细胞与类胚体的总rna，利用rtpcr方法鉴定分化细胞中神经细胞特异性基因的表达。【结果】培养的bipscs集落呈球形，中央隆起，周围界限清晰，与胚胎干细胞集落形态类似。bipscs碱性磷酸酶（ap）染色为阳性，并表达ssea-4干细胞特异性表面蛋白。bipscs通过类胚体介导分化，在未添加化学诱导物的条件下，可自由分化为nestin、gfap与nse阳性神经细胞，其阳性细胞率分别为(15.14±1.13)%，(6.25±0.35)%和(5.45±0.62)%；bipscs在ra诱导组中分化的神经细胞的数量最多，诱导后表达nestin、gfap和nse细胞的阳性率分别为(49.56±2.33)%，(16.58±1.28)%和(13.66±2.21)%；在β-me诱导组中，表达nestin的阳性细胞率为(42.23±1.25)%。2个诱导组的诱导效率与无化学诱导物组有显著差异(p＜0.05)。rt-pcr检测结果显示，不同诱导体系获得的分化细胞均能扩增到神经细胞特异性基因nestin和βⅲ-tubulin片段，产物长度与预期结果完全一致。【结论】bipscs在体外具有向神经细胞发育的能力；ra是诱导bipscs向神经细胞分化的良好诱导物。