香蕉枯萎病菌2个生理小种pl基因真核表达载体的构建与表达

【目的】构建香蕉枯萎病菌1号小种（foc1）和4号小种（foc4）果胶裂解酶（pectatelyases,pl）基因的真核表达载体，并进行诱导表达，为进一步研究pl在病原菌致病过程中的作用奠定基础。【方法】将质粒pmd18-pl-foc1、pmd18-pl-foc4和真核表达穿梭载体ppiczαa进行ecorⅰ和xbaⅰ双酶切反应，回收目的片段连接，转化至dh5α进行筛选扩繁，对菌落进行pcr鉴定后抽提质粒进行pcr和ecorⅰ、xbaⅰ双酶切鉴定。将阳性载体线性化后电击转化毕赤酵母smd1168感受态细胞，用甲醇进行诱导表达，对表达产物进行sds-page分析。【结果】成功构建了foc1和foc4pl基因的真核表达载体ppiczαa-pl-foc1和ppiczαa-pl-foc4，经甲醇诱导表达后分别获得了重组的pl蛋白，其分子质量约为23.4ku。【结论】foc1和foc42个香蕉枯萎病菌小种的pl基因在酵母中得到了成功表达。